自体CAR-T疗法一直被认为是CAR治疗肿瘤领域里主流的、有效的细胞疗法。尽管在目前的CAR产品中，自体CAR-T细胞疗法依旧占有着很大的比例，但是随着免疫细胞疗法的不断发展，自体CAR-T疗法的缺陷逐渐显露了出来。在这样的背景下，UCAR-T技术作为一种全新的思路开始崭露头角。在2020年7月18日第二届中国细胞生物资源与创新医药应用峰会【2020CIDS：在这里看见细胞治疗的未来（一）】，博生吉医药科技（苏州）的创始人、董事长首席科学官杨林博士在题为《Next Generation of Allogeneic Universal Cellular Products UCART-γδT》的报告中分享有关新一代异体通用型细胞治疗产品，引起业内的广泛关注。

 

自体CAR-T目前存在一些缺点，首先，由于自体CAR-T较长的vein to vein 时间，并不适用于一些疾病进展比较快的肿瘤患者，可能使这一部分患者失去治疗的机会。其次，由于不同患者的个体差异性，其自体T细胞在活性、功能上也不尽相同，可能会造成疗效上的差异。再者，自体CAR-T的制备成本比较高。自体CAR-T是一种定制化产品，患者外周血作为原材料的主要组成部分，没有办法大量的进行单个核细胞采集并大规模的生产，治疗的管理上并不是传统的库存运作个性化细胞治疗的模式，这些都会提高治疗的成本。最后，由于疾病进展程度的不同，有些患者已无法提供自身细胞，从而无法进行自体细胞治疗。 

 

 

 

异体现货型细胞UCAR-T的优势及临床试验

 

 

相比于自体CAR-T治疗，异体现货型细胞产品的最主要优势是弥补自体CAR-T产品可及性的问题，可以随时给患者治疗的机会，必要的时候可以重复给药，供应链相对比较简单。此外，异体现货型细胞产品可规模化制造，成本较低，并具有同时向多名患者给药的潜力。由于细胞产品来源于健康供体并且具有现货性，相比于自体细胞治疗更加快速可靠。另外，UCAR-T作为一个极具发展潜力的产品平台，可以做更多的创新与优化，比如进行安全性改进。

 

 

目前异体现货型细胞治疗的主流产品是基因编辑的T细胞，已有多个临床实验证明其具有一定的疗效，但由于其涉及到基因的永久性敲除，所以其长期的治疗风险未知，成本的合理性上还存有一定的空间，基因编辑T细胞的广泛性应用可能还有一段路要走。

 

 

NK细胞作为一种安全性高、副作用小的细胞类型，同样备受关注。尽管CD19-CAR-NK的首次临床实验告捷，但其长期疗效依旧有待观察。

 

 

此外，诱导性多能干细胞（iPSCs）作为一种来源可靠、成本效益更高、具有均一性的细胞产品，也有一定发展的空间，但是疗效也有待验证。

 

 

γδT细胞—非基因编辑通用型CAR-T的理性选择

 

 

γδT细胞相对于其他类型的T细胞处于更早期、更初级的阶段，这一类细胞的研究历程并不短，在1984年被首次发现，而在2018年之后被很多研究人员关注并进行研究。

 

 

γδT细胞基本背景：

1.含有γ链和δ链的γδ型受体。

2.γδT细胞一般仅占外周血T细胞的1%-5%，而在上皮组织中含量较高。

3.γδT细胞能够以非MHC限制性的特点对肿瘤抗原进行识别。

4.γδT细胞同时具有固有免疫细胞和适用性免疫细胞的特点，是桥接固有免疫和适应性免疫的重要桥梁

 

 

γδT细胞的种类：

1.γδT细胞主要包括Vδ1和Vδ2两个亚型。

2.Vδ2T细胞主要存在于外周血，占总γδT细胞的70%以上。

3.Vδ1T细胞主要分布于肠道上皮，真皮，脾脏和肝脏等组织中，在外周血中含量较低。

 

 

γδT细胞抗肿瘤的主要机制：

1.通过NK细胞受体直接杀伤肿瘤细胞。

2.通过凋亡相关因子配体（TRAIL/FASL）诱导肿瘤细胞的凋亡。

3.通过分泌的Granzyme/Perforin杀伤肿瘤细胞。

4.通过ADCC效应杀伤肿瘤细胞。

5.作为抗原递呈细胞，激活αβ细胞。

6.促进DC细胞的成熟。

7.促进B细胞产生抗体，提高体液免疫反应。

8.通过表达的4-1BBL，激活NK细胞。

 

 

一项对于25种癌症（共5782例样本）的研究数据分析显示，在所有肿瘤浸润的T细胞中，瘤内γδT细胞的浸润与良好的肿瘤预后具有相关性。

 

 

与αβT细胞相比，γδT细胞对于肿瘤的识别和杀伤不依赖于单一抗原的表达。相反，他们通过在细胞膜上表达的各种先天细胞毒性受体来识别各种癌细胞上的多种抗原。这种广泛的反应减少了单抗原丢失导致肿瘤免疫逃逸的机会；另外，该优点为缺乏明确的新抗原的肿瘤设计免疫疗法提供了机会，从而无需对效应细胞进行进一步的基因工程改造；在识别方式上，γδT细胞以MHC独立的方式识别其靶细胞，导致同种异体反应和GvHD的风险较低或不存在，从而成为了优质的异体现货型细胞产品的来源；γδT细胞浸润在各种各样的组织中，可以快速响应靶标并释放效应细胞因子。其中特别是vδ1亚型，具有优于αβT细胞的归巢优势，并在肿瘤低氧环境中浸润和发挥功能的能力更高。

 

 

人类γδT细胞根据其Vδ1链或Vδ2链的TCR使用情况分为两个主要子集：

 

Vδ1：

1.Vδ1γδT细胞代表实体组织中主要的γδT细胞亚群。

2.Vδ1主要存在于粘膜上皮组织中，约占大肠所有上皮内淋巴细胞的40%，并显示出强大的抗肿瘤活性。

3.Vδ1具有适应性免疫功能。

4.Vδ1被认为是更理想的效应细胞，细胞毒能力强，且具有较好的归巢和肿瘤浸润能力。

 

Vδ2：

1.外周血中的大多数γδT细胞使用Vδ2链，该链通常与Vγ9链配对，一旦被激活，Vδ2细胞就是促炎性细胞因子的来源，例如IFN-γ和TFN-α，通常识别细菌产生的焦磷酸盐抗原。

2.Vδ2占外周γδT细胞的50-95%

3.一般认为Vδ2具有较强的细胞毒能力，但是归巢、肿瘤浸润等能力较弱。

 

一项研究显示在卵巢癌肿瘤模型中，与Vδ2和Vδ1细胞相比，多克隆γδT细胞可以显著延长小鼠的生存期，说明多克隆γδT细胞具有更强的抗肿瘤活性。然而其中不同亚型的细胞比例尚不清楚，需要更多数据验证。

 

 

γδT细胞在外周血中的稀少数量和离体扩增的困难阻碍了其在过继性细胞免疫疗法的广泛应用，这成为了γδT细胞免疫治疗的一大挑战。在目前针对Vδ2亚型的制备工艺上，主要有两种方法来解决这一问题：在体外制备时，可以使用合成的磷酸抗原（pAg）或者双磷酸酯抗原（BP）如唑来膦酸进行激活；也可以直接通过体内给药（pAg/唑来膦酸）的方式来进行体内激活。然而如何获得Vδ1亚型以及多克隆型γδT细胞，这一问题有待继续研究。

目前γδT细胞相关国际上大概有30多项临床实验。

 

 

由于γδT细胞优良的抗肿瘤作用及对肿瘤抗原的识别具有非MHC限制性的特点，目前国际上已有多家公司正在开发基于γδT细胞的免疫疗法，包括GammaDelta Therapeutics和TC Biopharm、Lava Therapeutics、Gadeta等。

 

1.TC Biopharm：使用γδT细胞作为CAR技术的平台，利用它们仅对由癌细胞和感染细胞表达的磷酸化抗原的先天特异性来开发Co-stim CAR。

2.Gamma Delta Therapeutics：基于Vδ1T细胞具有更强的组织浸润能力，开发来自组织的Vδ1T细胞产品。

3.Lava Therapeutics：致力于开发下一代基于γδT细胞的双特异性抗体，激活Vγ9Vδ2T细胞。

4.Gadeta：将工程化αβT细胞与源自γδT细胞受体结合为一体的疗法，使其同时具有αβT细胞与γδT细胞的优点。

 

 

博生吉CAR-γδT技术

 

 

博生吉医药科技（苏州）有限公司目前推出的γδT细胞平台共有三代。第一代的Vγ9Vδ2T细胞平台采用了无血清培养基工艺，具有高纯度、高扩增效果、符合临床放行标准等特点。第二代的多克隆型γδT细胞平台同样采用无血清培养基工艺，细胞比例稳定（Vδ1 34%，Vδ2 53%，αβT 0.5%），纯度高达98%。

 

第三代γδ细胞平台引入了CAR技术，使细胞展现出特异性的生物学活性，取得了很好的效果。CAR-γδT展现出了与CARαβT相似的细胞毒性，但在持续性上表现较弱。 

 

在持续性的问题上，体外添加IL-2是一个很好的解决方法，增强了CAR-γδT的持久杀伤肿瘤细胞的能力，在胃癌模型中体现了很好的体外、体内的抗肿瘤效果。目前多克隆BCMA-CAR-γδT和CD19-CAR-γδT的研究也取得了较好进展。

 

虽然γδT相关临床试验在以较快的速度开展，但是公开报道的临床试验数据却寥寥无几。一项γδT临床试验表明，一名患者在较高回输剂量（8×109）时发生了剂量限制性毒性（弥散性血管内凝血），六例患者表现出SD，中位数进展时间为25.7周。此外，此项研究所展现出的其他不良反应包括胃肠道紊乱和流感类似症状，有时会出现低血压和心动过速，与IL-2合用时此症状会更明显。 

 

 

 

虽然与UCAR-αβT相比，UCAR-γδT的相关研究还处于一个初级的阶段，但是无法否认这项技术未来发展的潜力。在发展过程中，UCAR-T需要克服的主要障碍来自于大规模制备工艺体系的建立，更具前景的UCAR-γδT需要建立在多克隆γδT的基础上。此外，确定优质供体的生物标记物也可以促进UCAR-γδT的产业化进程。综上所述，UCAR-γδT的未来发展还有相当大的空间，值得关注与期待。

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