溶酶体组织蛋白酶（lysosomal cysteine cathepsins）能够促进蛋白水解进而加速肿瘤的恶化和转移。蛋白酶的活性由内源抑制剂（endogenous inhibitors）调节控制。组织蛋白酶抑制剂stefin B(Stfb)在乳腺癌中到底有哪些作用呢？德国Albert-Ludwigs-University的C Peters教授和他的团队针对此项问题进行研究，并于2015年8月发表于Nature杂志。

实验将Stfb裸鼠与患转移PyMT乳腺癌的裸鼠杂交。结果显示，缺失的Stfb的裸鼠的乳腺肿瘤尺寸减小，但是不会对转移的速度造成影响。Stfb缺失的小鼠肿瘤恶化的减少会同时伴随死细胞的产生率升高。原发性PyMT肿瘤细胞体外分析与对照组细胞相比，消融的Stfb的表达对增殖，血管再生，转移的影响不显著。然而，与溶酶体药剂Leu-Leu-OMe结合后，缺失Stfb的癌症细胞更易凋亡。消融的Stfb肿瘤细胞在加大氧化应激时更容易死亡。揭示了体内Stfb在保护癌细胞的促氧化应激性和通过溶酶体途径诱导细胞凋亡方面的作用。

实验部分，利用Ki67染色强度对增殖期间过程进行组化分析，CD31染色强度测量的细胞凋亡和肿瘤血管再生速率。

奥地利TissueGnostics公司的TissueQuest软件对Ki67进行定量分析（20个视野，40倍目镜）。

图中显示乳腺癌后期的增殖样本，细胞凋亡和血管密度。

（a）对14周的PyMT;Stfb^+/+小鼠和PyMT;Stfb^-/-的小鼠利用Ki67的原发性肿瘤检测。40倍目镜下的相对属型影像。

（b）PyMT; Stfb^+/+小鼠的Ki67的阳性细胞比例定量分析。

（c）凋亡细胞区域的免疫组化分析。

（d）凋亡细胞区域的比例。

利用HistoQuest 分析软件对14周的PyMT;Stfb-/-型和PyMT;Stfb-/-小鼠乳腺癌肿瘤组织进行Ki-67染色分析，使用流式散点图定量分析方式对表达Ki-67的阳性细胞自动计数，统计出Ki-67阳性细胞的比例。

相比传统的分析方法，HistoQuest更加客观、精准、高效，并且可以对组织中全部细胞进行分群，对细胞亚群进行再分类、分析。并能够在组织层面对单个细胞的染色情况进行精确定量，不仅能分析胞浆蛋白，对胞膜、胞核蛋白也能原位定量分析。（生物谷Bioon.com）

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