AZD7762

AZD-7762 是一种有效的ATP竞争性的细胞周期检测点激酶 (checkpoint kinase，Chk) 抑制剂，抑制Chk1的 IC50 为 5 nM。
 

生物活性

体外

AZD-7762（AZD7762）是体外同样有效的Chk1和Chk2抑制剂。AZD-7762有效抑制Chk1和Chk2，消除DNA损伤诱导的S和G 2检查点，增强吉西他滨和拓扑替康的功效，并调节下游检查点途径蛋白。如通过闪烁亲近测定法测量的，AZD-7762有效抑制cdc25C肽的Chk1磷酸化，IC 50为5nM。AZD-7762 的K i确定为3.6nM。动力学表征表明AZD-7762结合在Chk1的ATP结合位点，并且被认为以可逆的方式直接竞争ATP结合。显示AZD-7762消除了喜树碱诱导的G 2停滞，平均EC 5010 nM（n = 12）和100 nM范围内的最大废除。
 

体内

在大鼠H460-DNp53异种移植研究中，AZD-7762（AZD7762）以剂量依赖性方式增强吉西他滨的抗肿瘤活性，随着剂量增加％T / C降低（48％和32％，10和20 mg / kg AZD-7762，分别）。在与伊立替康组合的小鼠异种移植研究中，用载体，单独的伊立替康，单独的AZD-7762或与伊立替康组合的AZD-7762处理SW620建立的肿瘤。单独给药的AZD-7762显示出不显着的抗肿瘤活性，而单独的伊立替康显示出惊人且显着的活性（％T / C随剂量增加分别为9和1）。与AZD-7762组合，％T / C分别显着增加至-66％和-67％。AZD7762与CX-5461的组合诱导Tp53- null的癌细胞死亡（Tp53- / -）Eμ- Myc淋巴瘤细胞的体外和体内

实验参考方法

激酶测定

对于动力学分析，使用过滤器结合测定。测定反应含有以下浓度的ATP [0-600μM（冷+ Ci [ 33 P] ATP），测定的K m ]，Chk1（0.5 nM）和AZD-7762（0,1.5,5,10 nM） ）。将反应物在室温下温育20分钟，通过加入EDTA终止反应，转移至链霉抗生物素蛋白Flashplate，在室温下温育1小时，吸出，并用PBS洗涤孔。使用TopCount读数器对平板进行计数，并使用专有软件分析数据。

MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 

细胞分析

将SW620（每孔5.5×10 3个）或MDA-MB-231（每孔5×10 3个）细胞接种在96孔板中并孵育过夜。将细胞给药24小时，吉西他滨的9点滴定范围为0.01至100nM，有或没有恒定剂量的AZD-7762（300nM）。对照孔用单独的载体（0.1％DMSO）或300nM AZD-7762给药。24小时后，除去培养基，仅将AZD-7762加回到先前用AZD-7762处理的孔中另外24小时。然后将细胞在无药物培养基中再培养72小时。通过MTS测定确定对细胞增殖的影响。

MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 

Animal Administration

小鼠和大鼠

使用雄性NCr小鼠和雄性大鼠。对于小鼠中的异种移植模型，收获肿瘤细胞，通过离心5分钟沉淀，并重悬于无菌PBS中。使用25号针头将细胞（3×10 3 -6×10 6）皮下注射到小鼠的右侧腹中，体积为0.1至0.2mL。在给予化合物之前，允许肿瘤生长至100至200mm 3的指定大小。对于大鼠中的异种移植模型，收获细胞，通过离心5分钟沉淀，并重悬于50％无菌PBS和50％基质胶中。在细胞植入前5天，大鼠接受5Gy全身辐射剂量以改善肿瘤生长。H460-DNp53细胞（1×10 7使用25号针头，在异氟烷麻醉下，以0.2mL的体积将sc植入大鼠的右侧腹部。在施用AZD-7762之前，允许肿瘤生长至100至200mm 3的指定大小。通过尾静脉静脉内注射施用AZD-7762（10和20mg / kg）。使用循环时间表，治疗范围为三到五个周期。每个周期包括每3天施用标准药剂（吉西他滨或伊立替康），然后递送AZD-7762。用电子卡尺测量肿瘤体积并计算。

小鼠

C57BL / 6小鼠静脉内用2×10喷射5 Eμ- Myc的PBS中的B淋巴瘤细胞，并在注射后8天用药理学抑制剂处理。继续治疗小鼠直至达到伦理终点; 驼背姿势，荷叶边毛发，淋巴结肿大，呼吸困难，体重减轻超过起始体重的20％，行动不便或瘫痪。AZN7762在工作日每天以20mg / kg在0.9％盐水中以10.3％ - 羟丙基-β-环糊精的形式腹膜内递送。