药品概述
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Rebastinib(DCC-2036)是一种Bcr-Abl抑制剂的生物活性
体外
Rebastinib（DCC-2036）抑制ABL1天然和网守突变体ABL1 T315I，IC 50分别为0.8 nM和4 nM。Rebastinib有效（IC 50 0.82 nM）抑制u-ABL1 天然，其被认为主要存在于无活性的II型构象中。此外，Rebastinib还强烈抑制p-ABL1 天然（IC 50 2 nM），其更容易采用活性的I型构象。更重要的是，Rebastinib有效抑制u-ABL1 T315I（IC 50 5 nM）和p-ABL1 T315I（IC 50）4nM），由于T315I突变使活化疏水性脊柱稳定，因此两者都主要以I型构象存在。Rebastinib还有效抑制ABL1H396P（IC 50 1.4 nM），与ABL1 T315I一样，由于突变体Pro396强加的骨架扭转角受限，其易于主要以I型激活构象存在。除ABL1外，Rebastinib还抑制SRC家族激酶LYN，SRC，FGR和HCK，PDGFRα和PDGFRβ，IC 50为29±1,34±6,38±1,40±1,70±10和分别为113±10 nM。值得注意的是，Rebastinib保留了c-KIT（IC 50 481 nM）。Rebastinib有效抑制表达天然BCR-ABL1 天然的Ba / F3细胞的增殖（IC 50 5.4 nM）。Rebastinib还抑制Ph +细胞系K562的增殖（IC 50 5.5nM ）。REBASTINIB（DCC-2036）也能抑制BCR-ABL1的几种常见TKI抗性的突变体，包括G250E，Q252H，Y235F，E255K，V299L，F317L，M351T和增殖，在IC 50个小号范围从6-150纳米。Rebastinib有效抑制BCR-ABL1 天然（IC 50 29 nM）和BCR-ABL1 T315I（IC 50 18 nM）的自身磷酸化，以及两种细胞系中STAT5的磷酸化（分别为IC 50 28 nM和13 nM）。
体内
单次口服剂量的Rebastinib（DCC-2036）100 mg / kg可提供超过12μM的循环血浆水平长达24小时（数据未显示），并有效抑制BCR-ABL1信号传导长达8小时的Ba / 从荷瘤小鼠的BM和脾分离的F3-BCR-ABL1 T315I白血病细胞，通过磷酸-STAT5的细胞内流式细胞染色和磷酸-BCR-ABL1和磷酸-STAT5的组织提取物的免疫印迹评估。用口服强饲法以100mg / kg每天一次用Rebastinib 治疗携带Ba / F3-BCR-ABL1 T315I白血病细胞的小鼠显着延长其存活，而每天两次100mg / kg的伊马替尼是无效的。在这种侵袭性同种异体移植模型中，Rebastinib（DCC-2036）对治疗BCR-ABL T315I同样有效白血病作为100mg / kg的伊马替尼每天两次用于治疗BCR-ABL1 天然白血病，并且减少了治疗小鼠脾脏中的白血病细胞负荷。
Rebastinib(DCC-2036)是一种Bcr-Abl抑制剂的实验参考方法
激酶测定
来自患有复发和难治性Ph + B-ALL和可检测的T315I突变（等位基因频率40％）的患者的外周血细胞在补充有100μM2-巯基乙醇和0.5％BSA的IMDM中孵育过夜（初始细胞存活率> 90％），无药物或伊马替尼（1μM）或瑞巴斯替尼（DCC-2036）（50,200和1000 nM）温育后，裂解细胞，并如上所述对蛋白质提取物进行免疫印迹分析。将患有慢性期CML和L298V突变的患者的外周血单核细胞（7.5×10 5）在不同浓度的Rebastinib（DCC-2036）或DMSO中孵育3小时，然后进行裂解和免疫印迹分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
细胞分析
将Ba / F3细胞（3×10 3细胞/孔）或原代Ph +白血病细胞（5×10 4细胞/孔）一式三份铺板于含有测试化合物（例如，Rebastinib（DCC-2036））的96孔板中。72小时后，通过刃天青或MTT测定法定量活细胞。结果代表至少三次独立实验的平均值。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠通过用BCR-ABL1 天然或BCR-ABL1 T315I逆转录病毒转导而转化为白细胞介素-3独立性的
Ba / F3细胞（1×10 6）被静脉内注射到同系Balb / c受体中。注射后第3天开始，给予小鼠伊马替尼（100 mg / kg水，每日两次，通过口服强饲）或瑞巴司他（DCC-2036）（100 mg / kg，0.5％CMC / 1％Tween-80，一次）每日通过口服强饲法）或仅用载体（0.5％CMC / 1％吐温-80）。为了诱导CML样白血病，在静脉注射150mg / kg 5-氟尿嘧啶（5-FU）后4天收集雄性Balb / c供体小鼠的骨髓（BM），用BCR-ABL1 T315I逆转录病毒转导，和5 ×10 5将细胞静脉内注射到经亚致死剂量照射的（400cGy）Balb / c受体中。从移植后第5天开始，通过单独载体或Rebastinib（DCC-2036）以100mg / kg口服强饲法每天一次治疗组群。为了诱导B细胞急性淋巴细胞白血病，将未用5-FU预处理的供体的BM用BCR-ABL1 T315I逆转录病毒转导一次，并将1×10 6个细胞注射到经亚致死照射的Balb / c受体中。从移植后第8天开始，每天通过口服管饲法单独使用载体，每天两次，使用Rebastinib（DCC-2036），60 mg / kg，伊马替尼100 mg / kg（水中），或达沙替尼10 mg / kg（在80mM柠檬酸pH 3.1中）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
